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使用紫外可见分光光度计测蛋白质结构的原理是什么?如果出现负值是什么原因呢?(PS:已测过基线)
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使用紫外可见分光光度计测蛋白质结构的原理是什么?如果出现负值是什么原因呢?(PS:已测过基线)
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答案和解析
紫外可见分光光度计测定的是蛋白浓度,X射线晶体衍射测的才是蛋白质结构.紫外分光光度计测蛋白浓度原理:组成蛋白质的氨基酸里,有三种氨基酸:苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸具有苯环的共轭结构,它们对特定波长的紫外线具有吸收光谱,也就是说:它们对紫外线是有颜色的.每种蛋白质根据苯环的数量和分布都有一定的吸收强度,总的吸收值和分子的浓度呈正比.根据蛋白质溶液对280nm紫外线的吸收强度,可以测定出蛋白质的浓度.X射线晶体衍射测蛋白结构原理:蛋白质的肽链不是杂乱无章的,按照一定的规则盘曲成了特定的形状(蛋白质高级结构),每个碳-碳键都有它特定的构象,这种特定的结构是蛋白质作为分子机器的基础.结晶的蛋白质中,分子排成了空间重复的有序的结构,而原子之间的间隙与X射线的波长类似,构成了X射线的衍射光栅.当用X射线照射这种重复性的天然光栅时,通过波的衍射形成了有规则的干涉条纹,分析这些条纹就可以解析出蛋白质分子中每个原子的位置.
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