多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．下图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤．请回答：

Question

多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．下图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤．请回答：

（1）步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面___，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量．
（2）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是___．采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是___
（3）接种环通过灼烧来灭菌，完成步骤④中划线操作，共需灼烧接种环___次
（4）为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K．为了进一步鉴定菌株K并比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：
①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C
②向A、B、C三组锥形瓶中加入___的培养液．
③向A、B、C三组培养液中分别加入___、___、___．
④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃的降解率．

Answer 1

（1）步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的有两个，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量．
（2）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，由于线条末端细菌的数目比线条起始处要少，所以在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线．采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
（3）接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤④中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤④共需灼烧接种环6次．
（4）本实验的目的是比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力．实验设计需要遵循对照原则，对照组需加入等量无菌水；还需遵循单一变量原则，单一变量是菌种类比不同，即菌株Q菌液和突变株K菌液，所以实验设计如下：
①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C
②向9支锥形瓶中分别加入等量以多环芳烃菲为唯一碳源的培养液．
③向A、B、C三组培养液中分别加入等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液．
④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃菲的降解率．
故答案为：
（1）使菌株与培养液充分接触
（2）线条末端细菌的数目比线条起始处要少（或能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落
防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
（3）6
（4）等量的以多环芳烃菲为唯一碳源（说明：缺少所给答案中下划线的任何一个要点，均不给分）
等量的无菌水  菌株Q 菌液    突变株K菌液