为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：①制备含3%NaCl的固体培养基，以及含3%、5%和7%NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；②将高盐度废

Question

为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：
①制备含3%NaCl的固体培养基，以及含3%、5%和7%NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；
②将高盐度废水采用平板划线法接种于含3%Nacl的固体培养基，如图一．然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；
③将分离纯化后的菌株接种到试管固体斜面培养基上，适宜条件下培养适当时间，将该试管短期保藏待用；
④取固体斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目．测定结果如图二所示．

回答下列问题：
（1）配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是___．
（2）步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是___．完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环___次．
（3）步骤④中统计活菌数目用___法，该方法统计的活菌数___（填“大于”、“等于”或“小于”）实际数值．直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是___．若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时需要从___个培养瓶中取样．
（4）由图二可知，该耐盐菌最适合处理含___ （浓度）NaCl的废水．

Answer 1

（1）配制培养基时，需待各种营养成分配制完成后再调节pH，最后进行灭菌．
（2）平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；划线操作结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者．由于图1中有5次划线，每次划线完需灼烧，再加上第一步灼烧，故完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环6次．
（3）据实验操作可知，步骤④中常采用稀释涂布平板法统计活菌数目．用稀释涂布平板法统计菌落数目时，由于培养过程中两个或多个细胞可能生长在一起形成一个菌落，导致统计的菌落数往往比活菌的实际数目低．取样时不能直接从静置的培养液中取样计数，需将培养液摇匀后取样计数．由于每种浓度设3个重复实验，共有3种不同浓度，故每次统计活菌数目时，需要从9个培养瓶中取样．
（4）由图二可知，该耐盐菌 在3% NaCl最多，故最适合处理含 3% NaCl的废水．
故答案为：
（1）添加NaCI溶液、调节pH、灭菌
（2）杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）    6
（3）稀释涂布平板法     将培养液摇匀后取样计数    9
（4）3%  适当延长处理时间（增大接种量）