问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题很小白,我不懂重组质粒的电泳图是如何验证重组质粒成功构建了呢,因为跑出来的大小与重组质粒应有的大小一致?还有不明白重

Question

问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题
很小白,我不懂重组质粒的电泳图是如何验证重组质粒成功构建了呢,因为跑出来的大小与重组质粒应有的大小一致?还有不明白重组质粒pcr后的电泳图到底是目的基因的电泳图呢还是克隆载体的电泳图,是特异性PCR么?.实际上完全不明白为什么重组质粒pcr后又电泳一下的意义是什么.

Answer 1

首先,重组后的质粒肯定比载体大,可以通过电泳一定的区分,通过这个对比的话最好是酶切过后的
其次,因为你重组的片段是通过PCR扩增出来的,所以你重组要是成功了,那么就可以用相同的引物扩增出来,所以PCR做完了过后,电泳时会出现和目的条带一样大的条带,反之则不成功
显然这两种方法第二种最靠谱,第一种情况由于质粒较大,要是插入片段太小的话,可能分的不是很清楚,最后电泳的意义就在于看插入片段是否正确,并且理论上看是不是正确的插入方向