大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的

Question

大片段的RT-PCR
现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的引物是经过特异性分析的,应该没什么问题,不过现在连摸索引物的Tm都无法进行.

Answer 1

博凌科为-为你Takara LA Taq酶,体系同说明书.反应程序是：（要求引物Tm值在70度左右,但上下只能浮动2度.Primer 5计算） No.of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min