分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8

Question

分离与鉴定蛋白质
已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8.3,如何分离和鉴别该植物叶绿体蛋白A?

Answer 1

1.破碎细胞（简单 自己查资料）
2.提取纯化叶绿体（简单 自己查资料）
3.用pH 8.25 缓冲液 破碎叶绿体
4.离心去除沉淀（沉淀含有蛋白B）收集上清液（含有蛋白A）
5.缓慢调解上清液pH 到6.8-6.9,离心 收集沉淀（含有蛋白A）
6.用pH 到6.8-6.9的缓冲液洗涤沉淀.离心收集沉淀.
7.最后溶解于pH 7.6-7.8 的 比如pBS 中
8.鉴定 SDS-PAGE （加2mer 等还原剂）,电泳 观察条带数目和分子量