DNA连接酶的种类及区别?限制酶和DNA连接酶作用的化学键分别是什么?载体的条件是?（3点）

Question

DNA连接酶的种类及区别?限制酶和DNA连接酶作用的化学键分别是什么?载体的条件是?（3点 ）

Answer 1

1.
（1）E·coli DNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端；
（2）T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低.
（3）热稳定的DNA连接酶（thermostableDNAligase）,是从嗜热高温放线菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分离纯化的,一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶.
2.
DNA连接酶：连接DNA单链与DNA单链之间的磷酸二酯键
限制性核酸内切酶：剪切双链DNA内的磷酸二酯键
3.
作为运载体必须具有三个条件：
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；
②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入；
③有一定的标记基因,便于进行筛选.如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因.一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建.现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的.