酸法水解蛋白质的具体操作步骤?蛋白质在酶、酸或碱的作用下能水解成氨基酸.其中酸法水解蛋白质在实验室中如何进行操作?要求具体操作步骤.如果您的表述中有参考文献,需列出.

Question

酸法水解蛋白质的具体操作步骤?
蛋白质在酶、酸或碱的作用下能水解成氨基酸.其中酸法水解蛋白质在实验室中如何进行操作?要求具体操作步骤.如果您的表述中有参考文献,需列出.

Answer 1

1．蛋白质的水解
蛋白质可以用酸、碱或酶如胃蛋白酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶水解成最终产物氨基酸实验室中常使用酸解法水解蛋白质.当在6mol／I盐酸溶液中将蛋白质在110℃加热大约20h,肽键断裂,此时蛋白质完全分解为氨基酸.
酸法水解蛋白质的优点是在水解过程中不发生外消旋作用,所得到的氨基酸均为L—氨基酸.大多数氨基酸在煮沸酸中是稳定的,但色氨酸则完全被破坏.丝氨酸和苏氨酸在酸解过程中或多或少地也有破坏.色氨酸的水解产物已知是一种棕黑色的物质——腐黑质,因此,用酸法水解蛋白质得到的水解液为棕黑色的.
2．纸层析法分离氨基酸
纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法.它利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数,经层析而达到分离的目的.在一定条件下,一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数.
层析溶剂(又称推动剂),是选用有机溶剂和水组成的.滤纸纤维素与水有较强的亲和力(纤维素分子的葡萄糖基上的—OH基与水通过氢键相作用)能吸附很多水分,一般达滤纸重的22％左右(其中约有6％的水与纤维素结合成复合物),由于芦部分水扩散作用降低形成固定相；而推动剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱,可在滤纸的毛细管中自由流动,形成流动相.层析时,点有样品的滤纸一端浸入推动剂中,有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处,使其上的溶质依据本身的分配系数在两相间进行分配.随着有机溶剂不断向前移动,溶质被携带到新的无溶质早并继续在两相间发生可逆的重新分配,同时溶质离开原点不断向前移动,溶质中各组分的分配系数不同,前进中出现了移动速率差异,通过一定时间的层析,不同组分便实现了分离.物质的移动速率以Rf值表示.
各种化合物在恒定条件下,层析后都有其一定的Rf值,借此可以达到分离、定性、鉴别的目的.
溶质的结构与极性、溶剂系统的物质组成与比例、pH值、滤纸质地以及层析温度、时间等都会影响Rf值.