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引物上下游退火温度相差太多，如何选择退火温度呢？比如satt427的上游温度为65.15，而下游为57.26.而且引物是的退火温度是不是上下游的温度的平均值然后减去5度以内的温度？
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引物上下游退火温度相差太多，如何选择退火温度呢？比如satt427的上游温度为65.15，而下游为57.26.而且引物是的退火温度是不是上下游的温度的平均值然后减去5度以内的温度？
▼优质解答
答案和解析
你设计的引物退火温度相差并不是太多的啊，我们一般将上下游引物退火温度平均值加2度作为退火温度，如果你不放心可以做个梯度PCR，一般可以筛选出相对较好的退火温度。如果还是没P出来可以用TouchDown PCR试试
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