关于PCR溶液体系的配制每个PCR反应包括25ng模板DNA,0.5μmol/L正反向引物,0.2mmol/LdNTPmix,0.5个单位的TaqDNA聚合酶和1×PCRbuffer(Fermentas),反应体系为10μl.请问每个试剂应该去多少,buffer试剂是10
每个PCR反应包括25 ng模板DNA,0.5 μmol/L正反向引物,0.2 mmol/L dNTP mix,0.5个单位的Taq DNA聚合酶和1×PCR buffer(Fermentas),反应体系为10μl.请问每个试剂应该去多少,buffer试剂是10的.
加入量和浓度有关,只要知道每一个要加入物质的浓度就可以算出来了:
模板的体积=25ng/模板的浓度 (这个值需要测定,如果实在不知道模板浓度,就加0.1-0.5ul左右吧)
引物的体积=0.5umol/1000uL * 10uL / 引物浓度 (根据自己配制的情况,有时候可能是100mM或者是200mM)
Taq酶体积= 0.5 U / Taq 酶活力单位浓度(标注在管子上,U/uL表示的数字)
Buffer的量应该是1uL.(这里需要解释一下,经过确认,没有1X的buffer,因为如果是1X的话,没法加了,所以正确的应该是10X的buffer,加入量就是稀释10倍,所以10uL体系加1uLbuffer)
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