关于“脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法”的一些问题“脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法”里,先用氚标记的TdR培养细胞一段时间,使细胞均处于S期并被标记,然后洗脱氚标

Question

关于“脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法”的一些问题
“脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法”里,先用氚标记的TdR培养细胞一段时间,使细胞均处于S期并被标记,然后洗脱氚标记的TdR,改为新鲜培养液培养一段时间,被标记的细胞陆续进入M期.
提问：1、TdR在这里是作为DNA复制的原料吧?
2、用氚标记的TdR培养细胞后,为什么不能通过S期?如果停在S期的原因是有TdR而导致不能通过S期检验点,那么洗脱是指洗去细胞外的标记培养液,还是指洗去细胞内的TdR?
3、如果是前者,置换新鲜培养液后细胞内应仍有TdR,为什么可进入M期?如果是后者,为什么可观察到被标记的细胞,不是洗脱了么?

Answer 1

1.对的
2.看你要观测具体哪个阶段了,不是因为有TdR所以过不了S期的check point,仅仅是实验希望可以观测S期之后M期的情况,洗脱仅仅是洗掉那些多余的,没有被用于DNA复制的
总的来说氚标记的胸腺苷依然是胸腺苷,一样可以正常用于DNA复制,不会引起什么问题
可以看到被标记的是因为洗脱洗掉的是没有被用于DNA复制的,那些个细胞里面仍然含有标记的TdR