鉴定转录因子与启动子结合的方法和原理

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鉴定转录因子与启动子结合的方法和原理

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答案和解析

一般有体外和体内两种较为常用的方法：
体外：用EMSA
通常将纯化的蛋白和32P同位素标记的DNA探针（取promoter部分）一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针.DNA-复合物比非结合的探针移动得慢.然后再放射自显影的仪器上就可以看到条带,如果条带移动得慢,就是有结合.
体内：报告基因方法
就是将你想要检测的promoter装在一个载体上,然后导入特定的细胞内.该细胞内有表达或者过表达你所想检测的转录因子.如果转录因子可以结合在你的promoter上,就可以启动下游的报告基因表达.报告基因可以是荧光蛋白,也可以是荧光素酶.
注：promoter--启动子.其实enhancer也可以用来当promoter.

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