重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法．该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定

Question

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法．该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景．图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程．其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别PCR，获得有重叠链的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因．结合所学知识，分析下列问题．

（1）引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性___．
（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为___．
（3）若在引物l和引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均复制一次，共产生___种双链DNA分子．
（4）在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过___ 次复制．
（5）若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：___、___、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因．

Answer 1

（1）由于C-C之间有三个氢键，而A-T之间有两个氢键，所以引物中C+C含量越高，引物与模板DNA的结合就越稳定．（2）从图中可以看出，引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对，所以如果将引物2和3放在一个反应系统中，...