雌雄同株植物拟南芥是遗传学研究的常用材料，野生型拟南芥的种皮为褐色（AA），突变型的种皮为黄色（aa）．某科研小组利用转基因技术，将萝卜体内的一个A0基因（控制红色种皮）定向

Question

雌雄同株植物拟南芥是遗传学研究的常用材料，野生型拟南芥的种皮为褐色（AA），突变型的种皮为黄色（aa）．某科研小组利用转基因技术，将萝卜体内的一个A₀基因（控制红色种皮）定向插入野生型拟南芥的M基因中（M基因与种皮颜色无关，A基因和M基因在染色体上的位置关系如右图），通过培养获得转基因植株X．

（1）基因工程的操作过程中，萝卜A₀基因与运载体DNA用EcoRⅠ切割后产生的黏性末端之间可以相互黏合．这种黏合通过___之间形成___来实现．然后，___酶可以将萝卜A₀基因与运载体DNA连接起来，即完成了四个操作步骤中的___．
（2）研究人员进一步研究发现，A₀基因插入M基因中会导致M基因功能丧失．为了推测M基因的功能，研究人员利用转基因植株X设计了如下的实验：

亲本	子代种皮颜色及比例
植株X（♀）×野生型（♂）	红色：褐色≈1：1
植株X（♂）×野生型（♀）	全为褐色

由实验结果推测，植株X产生的雄配子所含控制种皮颜色的基因是___，进而推测基因M的功能可能与___有关．A₀基因相对于A基因为___性，若植株X自交，子代中红色种皮植株所占的比例___．

Answer 1

（1）基因工程的操作过程中，构建基因表达载体时，应该用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，以产生相同的黏性末端；黏性末端可以相互黏合，这种黏合通过（互补）碱基之间形成氢键来实现．然后，DNA连接酶可以将萝卜A₀基因与运载体DNA连接起来，即完成了四个操作步骤中的目的基因与运载体结合．
（2）测交实验可以验证F₁产生的配子种类及比例．由实验结果可知，当母本为植株X时，后代比例符合测交的结果；当父本为植株X时其后代都是褐色，说明植株X含有A₀基因的花粉致死，因为插入M基因中会导致M基因功能丧失，由此可以推测M基因可能与雄配子的正常发育有关，且A₀基因（红色）相对于A基因（褐色）为显性，则植株X产生的雄配子所含控制种皮颜色的基因是A．若植株X自交（A₀AMM），由于含有A₀基因的花粉致死，则子代中红色种皮植株：褐色种皮植株=1：1，即红色种皮植株所占的比例(1)/(2)．
故答案为：
（1）（互补）碱基   氢键  DNA连接  目的基因与运载体结合
（2）A   雄配子的正常发育（或花粉的活性）  显    (1)/(2)