流式细胞仪文献说流式中各种细胞的低表达中表达高表达,是怎样区分各种表达量的.就是我怎么才能说这是高表达的细胞

Question

流式细胞仪
文献说流式中 各种细胞的低表达 中表达 高表达,是怎样区分各种表达量的.就是我怎么才能说这是高表达的细胞

Answer 1

有几种方法.一是要研究的蛋白是通过载体在细胞中过表达的,而且这种蛋白还带有一个荧光蛋白作为标记,那可以直接使用流式细胞仪来测量荧光强度,荧光强度越高,就说明蛋白的表达量越高.
如果这个蛋白是细胞本身固有的蛋白,就需要用荧光标记的抗体来识别.抗体和蛋白结合后,在用流式细胞仪检测,荧光强度高的那组细胞就是高表达的（和其他组比较）.
这个方法,你必须有几组对照.一是无荧光抗体的细胞,原来设定阴性阈值.另外,还要有同型对照,就是非特异性的荧光标记的同型抗体,用来设定非特异性的抗体结合.最后就是你的几组实验细胞,比较荧光强度.荧光强度最高的,一般就是高表达.不过也可能所有的都是低表达.