在土壤中存在多种自生固氮菌，它们对增加土壤中的氮素有重要意义．某实验小组试图从土壤中分离自生固氮菌，并制成菌肥施入土壤中增加土壤肥力．实验流程大致如图所示．（1）图4中

Question

在土壤中存在多种自生固氮菌，它们对增加土壤中的氮素有重要意义．某实验小组试图从土壤中分离自生固氮菌，并制成菌肥施入土壤中增加土壤肥力．实验流程大致如图所示．

（1）图4中的培养基成分如下表：

C6H12O6	KH2PO4	MgSO4	NaCl	CaSO4	蒸馏水	琼脂	pH
10g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	1000mL	10g	7.0

此培养基的特点是______，原因是______．
（2）从功能上看，此培养基属于______培养基．从形态上看，此培养基属于固体培养基，有利于______．
（3）因为琼脂中常含有氮，因此使用前需要用自来水流水冲洗几天，再用______浸泡，洗涤几次，以除去其中的氮．
（4）实验步骤3在超净台上，将接种环在______上灭菌冷却后，才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面，也可采用______法接种．接种后必须将培养皿______培养，以免冷凝水滴落．
（5）实验的培养时间不宜过长，否则______．
（6）小组成员用放射线处理分离得到的固氮菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如下表．

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物甲，能生长
B	不生长	添加营养物乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物甲、乙就能生长

①突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是______．
②将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中却能正常生长，那么最可能原因是______．

Answer 1

（1）培养基的成分包括水、无机盐、碳源、氮源及生长因子，由表可知，该培养基中无氮源，故在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长．
（2）从功能上看，此培养基属于选择培养基，从形态上看，由于含有凝固剂琼脂，此培养基属于固体培养基，有利于菌种的分离纯化．
（3）因为琼脂中常含有氮，因此使用前需要用自来水流水冲洗几天，再用蒸馏水浸泡，洗涤几次，以除去其中的氮．
（4）接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法，接种环需在酒精灯火焰上灭菌冷却后，才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面，也可采用平板划线法接种，接种后必须将培养皿倒置培养，以免冷凝水滴落，防止杂菌污染．
（5）培养时间过长可能导致菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长．
（6）根据题意突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而将A+B就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲．
故答案为：
（1）缺乏氮源  在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长
（2）选择    分离纯化  
（3）蒸馏水
（4）酒精灯火焰    划线  倒置  
（5）菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长
（6）①自身不能合成物质甲    ②突变株A能合成物质乙，突变株B能合成物质甲，因此一起培养可以相互支持保证必需的营养要素