如表所示列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．下列说法错误的是（）限制酶EamHⅠHtndⅢEcoRⅠSmaⅠ识别序列及切割位点A．一个图1所

Question

如表所示列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．下列说法错误的是（　　）

限制酶	EamHⅠ	HtndⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

A．一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团
B．用图1中的质粒和图2中的目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割
C．图2中为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoRⅠ
D．为了获取重组质粒，最好用BamHⅠ和HindⅢ同时切割质粒和外DNA

Answer 1

A、质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被该酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团，A错误；
B、基因表达载体必须具备目的基因、启动子、终止子、标记基因，图中质粒的标记基因为抗生素抗性基因，而Sma I的切割位点就在该基因上，因此用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割，B正确；
C、由于同种限制酶切割形成的黏性末端相同，图2中为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoRⅠ，C正确；
D、使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，各自会有不同黏性末端，能防止自身环化，D正确．
故选：A．