哺乳动物的红细胞在清水中会很快膨胀破裂，而爪蟾的卵母细胞在清水中不会发生这种变化，科学家从哺乳动物的细胞膜上分离到一种分子量在28kD的膜蛋白，初步判断这种蛋白质可能提供了

Question

哺乳动物的红细胞在清水中会很快膨胀破裂，而爪蟾的卵母细胞在清水中不会发生这种变化，科学家从哺乳动物的细胞膜上分离到一种分子量在28kD的膜蛋白，初步判断这种蛋白质可能提供了水分子的顺浓度跨膜运输的通道，称为水通道蛋白．为了探究其功能，科学家做了相关研究，请分析回答．
（1）从早幼红细胞中提取出该蛋白质的mRNA，通过___获得cDNA片段，以该cDNA为模板进行PCR，向反应体系中加入dNTP、Taq酶及___．至少需要___个循环才能产生目的基因片段．扩增后的DNA经人工转录后获得大量的mRNA注射到爪蟾的卵母细胞中．结果与___对照组相比，实验组卵母细胞很快膨胀破裂．
（2）研究人员将纯化的水通道蛋白、KCl溶液和磷脂分子构建成球形脂质体，再将脂质体转移至蒸馏水中，发现脂质体也发生了快速膨胀破裂．此实验说明吸水是水通道蛋白的___（直接、间接）作用．
（3）目前认为，水分子跨膜运输有两种机制，一种是经过磷脂双分子层间隙的自由扩散，另一种是通过水通道蛋白的快速协助扩散．为证明后一种形式的存在，如何构建脂质体进行证明？
方法：___．
预期结果：___．

Answer 1

（1）从早幼红细胞中提取出该蛋白质的mRNA，通过逆转录获得cDNA片段，以该cDNA为模板进行PCR技术，向反应体系中加入dNTP、Taq酶及引物．至少需要3个循环才能产生目的基因片段．
（2）根据题干分析可知，此实验说明吸水是水通道蛋白的直接作用．
（3）为证明水分子跨膜运输是通过水通道蛋白的快速协助扩散，可以将KCl溶液和磷脂分子构建成球形脂质体，再将脂质体转移至蒸馏水中，结果脂质体也吸水膨胀，但比有水通道时速度慢．
故答案为：
（1）逆转录（反转录）       引物         3
（2）直接
（3）将KCl溶液和磷脂分子构建成球形脂质体，再将脂质体转移至蒸馏水中           脂质体也吸水膨胀，但比有水通道时速度慢