正常细胞中含有抑癌的P53基因，能表达抗病毒蛋白，帮助修复轻度变异的基因，也能使重度变异的细胞发生凋亡而避免肿瘤发生；若它失活而不能表达，则基因突变的细胞易形成肿瘤．基因

Question

正常细胞中含有抑癌的P53基因，能表达抗病毒蛋白，帮助修复轻度变异的基因，也能使重度变异的细胞发生凋亡而避免肿瘤发生；若它失活而不能表达，则基因突变的细胞易形成肿瘤．基因治疗肿瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖细胞和对人体基本无害而成为良好的基因载体．野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒复制基因E1，因此需要重新构建有疗效的、安全的腺病毒．图甲、乙中箭头所指为相应限制酶切点．

（1）构建重组腺病毒时，限制酶最好选择___，这样既可以去除___基因以防止病毒复制后损伤健康细胞，同时还能破坏___基因以防止其___．
（2）将目的基因与腺病毒重组时，重组的成功率较低，依然还有大量非重组的野生型病毒的DNA，这是因为___．
（3）要获得更多重组病毒，采用的方法是：获取人体某肿瘤细胞→将E1 基因导入肿瘤细胞的基因组中→重组病毒侵染含E1基因的肿瘤细胞→体外培养侵染的细胞．该过程中利用肿瘤细胞能不断复制的特点可以为病毒提供更多的生活场所，那么选用含E1基因的肿瘤细胞进行重组病毒侵染的理由是___．筛选重组病毒，可采用离心分层纯化法，其依据是___．
（4）某DNA 分子片段含有1000 个碱基对．经扩增后，分别只用限制酶EcoRI 与同时用EcoRI和HalⅢ两种方法切割，其电泳结果如图丙所示，可推断限制酶HalⅢ在该DNA片段上的切割点有___个．

Answer 1

（1）根据题干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒复制基因E1”可知，构建基因表达载体时，应选用EcoRI和BamHI切割载体和含有目的基因的DNA，这样既可以去除E1基因以防止病毒复制后损伤健康...