红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的．血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2．我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．

Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的．血红蛋白的主要功能是携带O₂或CO₂．我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．请回答下列有关问题．
（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：______、______、______和______．
（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液．
①加入柠檬酸钠的目的是______．
②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液．
（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离．
①透析的目的是______；
②透析的原理是______．
（4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．
①样品纯化的目的是______．
②血红蛋白有什么特点？______．
这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？______．

Answer 1

（1）血红蛋白的提取和分离一般分为4步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．
（2）①采取血液时要在采血容器中预先加入柠檬酸钠以防止血液凝固．
②样品处理又包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析4步．
（3）①透析即是血红蛋白的粗分离，透析的目的是除去分子量较小的杂蛋白．
②透析的原理是透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内．
（4）①样品的纯化是通过胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去．
②血红蛋白呈红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作程序．
故答案为：
（1）样品处理　粗分离　纯化　纯度鉴定
（2）①防止血液凝固　
②红细胞的洗涤　血红蛋白的释放
（3）①去除分子质量较小的杂质　
②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内
（4）①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
②血红蛋白呈红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作