目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示．（1）构建人工质粒时要有抗性基因，

Question

目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示．

（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于___．
（2）pBR32Z分子中有单个EcoRI限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割．若在某目的基因的两侧各有1个EcoRI的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端．___．
（3）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复键，成功的获得了重组质粒．说明___．
（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无amp^R和tet^R的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）．与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是___．

Answer 1

（1）质粒上的抗性基因可作标记基因，便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因．（2）在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，即目的基因两侧有-GAATTC-，且EcoRⅠ的切割位点在G和A之间，因此目的基因两侧被限制酶EcoRI切...