下面是探究固定化酵母菌增殖能力的研究，请协助完成相关内容．海藻酸钠与氯化钙反应产生海藻酸钙，使凝胶珠有稳定的结构；而柠檬酸钠能与海藻酸钙反应，会使海藻酸钙溶解．实验材

Question

下面是探究固定化酵母菌增殖能力的研究，请协助完成相关内容．
海藻酸钠与氯化钙反应产生海藻酸钙，使凝胶珠有稳定的结构；而柠檬酸钠能与海藻酸钙反应，会使海藻酸钙溶解．
实验材料（略）
主要实验步骤
步骤1：酵母菌的活化．
步骤2：配制质量分数为2%的海藻酸钠溶液，灭菌冷却→A→用注射器造凝胶颗粒→常温下利用CaCl₂溶液固定凝胶颗粒．
步骤3：待固定化结束后，移去CaCl₂溶液，再用无菌水洗涤2〜3次．将固定化凝胶珠分成两等份，取其中一份接种到固定化酵母增殖培养液中，在28℃下振荡培养24h，得到固定化增殖酵母；另一份留用．
步骤4：将B放入一定体积的质量分数为5%的柠檬酸钠溶液中，振荡使凝胶珠完全溶解；再用无菌水适当稀释后，用血细胞计数板在显微镜下计数、统计计算出凝胶珠内包埋的菌数，比较酵母菌在载体中的生长状况．
请问答下列问题：

（1）完善实验步骤：A___；B___．
（2）步骤1活化酵母菌的目的是___．干酵母粉活化操作的主要注意事项是___．
（3）步骤2中制得的凝胶珠直径不宜过大，因为凝胶珠相对表面积增大，不利于固定化酵母细胞与外界进行物质交换，实验中可以通过___实现对凝胶珠直径的控制．步骤3中“用无菌水洗涤2〜3次”的主要目的是___．
（4）在“步骤4”实验中，是否需要进行重复实验？应如何进行？___．
（5）如图所示曲线是某实验结果，由图可以得出的结论是___．

Answer 1

（1）固定化酵母细胞的制各：配制2%每藻酸钠溶液，灭菌冷却→A将酵母悬液与海藻酸钠溶液按一定比例均匀混合→用注射器造粒（直径约为3mm珠状颗粒）→常温下固定36h．
固定化酵母增殖测定：将B等量增殖前后的固定化酵母凝胶珠放入一定体积的5%柠檬酸钠溶液中，振荡使凝胶珠完全溶解；再用无菌水适当稀释后，用血球计数板计数凝胶球内包埋的菌数，比较酵母菌在载体中生长状况．
（2）步骤1活化酵母菌是指使酵母菌恢复正常生活状态．干酵母粉活化操作的主要注意事项是由于酵母细胞吸水后会膨胀，因此在活化时要使用较大的容器装．
（3）实验中可以通过控制注射器的针尖的大小对凝胶珠的大小进行控制．步骤3中“用无菌水洗涤2〜3次”的主要目的是洗去CaCl₂，防止凝胶珠因固定时间过长而硬度过大，影响凝胶珠的通透性．
（4）在“步骤4”实验中，需要进行重复实验，重复取样品液进行显微计数．
（5）由图可以得出的结论是固定化酵母增殖速率高于游离酵母．
故答案为：
（1）将酵母悬液与海藻酸钠溶液按一定比例均匀混合    等量增殖前后的固定化酵母凝胶珠
（2）使酵母菌恢复正常生活状态    由于酵母细胞吸水后会膨胀，因此在活化时要使用较大的容器装
（3）控制注射器针的大小，挤压速度等     洗去CaCl₂，防止凝胶珠因固定时间过长而硬度过大，影响凝胶珠的通透性
（4）需要，重复取样品液进行显微计数
（5）固定化酵母增殖速率高于游离酵母