探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数．实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固

Question

探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数．
实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖．
材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱．
方法步骤：
（1）倒平板．分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在___操作．
（2）制备土壤稀释液．取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．用无菌移液管吸取上清液 1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到10⁷倍稀释度．为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰___cm处．
（3）涂布．按照由10⁷～10³稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布___个平板．
（4）培养．放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3～4d．一般每隔24h统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止___．
（5）细菌的计数．选取菌落数在30～300的平板进行计数．如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌株数是___．（稀释度是10⁵）
（6）预期结果．相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数___（填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目．理由是___．

Answer 1

（1）倒平板应在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染．（2）制备土壤稀释液．取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．用无菌移液管吸取上清液 1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度．为实现...