微生物诱变后的筛选环节极为繁杂，定向筛选常用来筛选营养缺陷型突变株．无氮MM培养基（基本培养基）仅能满足野生型菌株生长需要，该培养基中营养缺陷型菌株能存活但不能繁殖．CM培

Question

微生物诱变后的筛选环节极为繁杂，定向筛选常用来筛选营养缺陷型突变株．无氮MM培养基（基本培养基）仅能满足野生型菌株生长需要，该培养基中营养缺陷型菌株能存活但不能繁殖．CM培养基（完全培养基）可满足营养缺陷型菌株营养需要．已知青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成．据图回答下列相关问题：

（1）据培养结果推测：1培养皿中是___培养基，2培养皿中是___培养基，MM培养基浓缩缺陷型后需洗涤和稀释，才能涂平板进行母皿CM培养，假设只进行10^-1，10^-2和10^-3三级梯度稀释，简述获得第三级梯度10^-3的操作步骤：___．
（2）诱变后筛选出的营养缺陷型菌株是___．为验证该菌株是营养缺陷型，可以___．
（3）MM培养基加青霉素的目的是___，加青霉素后培养能浓缩缺陷型的原因是___．
（4）无氮MM培养基培养2小时的目的是___．

Answer 1

（1）无氮MM培养基（基本培养基）仅能满足野生型菌株生长需要，该培养基中营养缺陷型菌株能存活但不能繁殖．CM培养基（完全培养基）可满足营养缺陷型菌株营养需要．根据图中显示1号培养基上微生物数目较多，2号数目较少，可以推断出：1培养皿中是CM（或完全）培养基，2培养皿中是MM（或基本）培养基．假设只进行10^-1，10^-2和10^-3三级梯度稀释，可以用稀释涂布平板法，获得第三级梯度10^-3，具体操作步骤：从10^-2稀释液中取样1mL，加9 mL无菌水摇匀，弃去1 mL，即是10^-3梯度．
（2）由于CM培养基（完全培养基）可满足营养缺陷型菌株营养需要．因此诱变后筛选出的营养缺陷型菌株在MM培养基上不生长，在CM培养基上能生长的菌落．为验证该菌株是营养缺陷型，可以重复实验，将菌株再次接种在MM和CM培养基，对比生长状况．
（3）青霉素可以抑制细菌细胞壁的生物合成，用于淘汰野生型菌株．由于青霉素能抑制细胞壁的合成，野生型因能在MM培养基繁殖而被杀死（营养缺陷型因不能在MM培养基繁殖而被保留），因此加青霉素后培养能浓缩缺陷型．
（4）为了保证诱变出的营养缺陷型不繁殖，防止营养缺陷型因分裂遭误杀（或耗净营养缺陷型在CM培养基中吸收的营养物质），无氮MM培养基培养2小时．
故答案为：
（1）CM（或完全）　MM（或基本）     从10^-2稀释液中取样1mL，加9 mL无菌水摇匀，弃去1 mL，即是10^-3梯度
（2）在MM培养基上不生长，在CM培养基上能生长的菌落        将菌株再次接种在MM和CM培养基，对比生长状况
（3）抑制细菌细胞壁的生物合成，用于淘汰野生型菌株    青霉素能抑制细胞壁的合成，野生型因能在MM培养基繁殖而被杀死（营养缺陷型因不能在MM培养基繁殖而被保留）
（4）保证诱变出的营养缺陷型不繁殖，防止营养缺陷型因分裂遭误杀（或耗净营养缺陷型在CM培养基中吸收的营养物质）