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在cDNA技术中,所形成的发卡环可用什么酶除去
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在cDNA技术中,所形成的发卡环可用什么酶除去
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答案和解析
可以用单链特异的 S1 核酸酶切去.但是 S1 核酸酶的处理,常常会“修剪 ” 过多的 cDNA 顺序,使 cDNA 丢失了 mRNA 5' 端的部分顺序.另一种方法是用大肠杆菌的 RNase H 进行修饰.RNase H 能识别 RNA-DNA 杂交分子并把其中的 RNA 切割成短的片段,这些 RNA 短片段仍与 cDNA 第一链结合,可被新合成的 DNA 所取代.新合成的 DNA 存在切口,用 DNA 连接酶把这些切口连接在一起形成一条完整的 DNA 链.RNase H 法优于 S1 核酸酶法,它能获得包括 mRNA 5' 端全部或绝大部分的更长顺序 cDNA 分子.
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