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测序两端不准确为什么基因测序的结果一般会认为序列两端不准确?
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测序 两端 不准确
为什么基因测序的结果一般会认为序列两端不准确?
为什么基因测序的结果一般会认为序列两端不准确?
▼优质解答
答案和解析
因为测序的时候荧光标记的ddNTP是过量的,反应结束后一并沉淀下来干扰了小分子量的引物后面几个核苷酸的信号.
至于后面一般800bp以上的区段也是不可信的,这也是目前测序公司技术优劣的一个指标,技术好的能读到1100bp,技术差的可能只有500bp.
原因就在于用的分离胶好不好,因为分子量越大,同样相差1个核苷酸所造成的影响越小.21个bp的片段和22个bp的片段可以分的比较开,而801bp和802bp就几乎贴在一起了,越到后面贴的越紧,最后就连成一片分不清谁是谁了.
具体从哪里到哪里可信要看测序结果的信号峰.强烈的单峰才是有效的.
至于后面一般800bp以上的区段也是不可信的,这也是目前测序公司技术优劣的一个指标,技术好的能读到1100bp,技术差的可能只有500bp.
原因就在于用的分离胶好不好,因为分子量越大,同样相差1个核苷酸所造成的影响越小.21个bp的片段和22个bp的片段可以分的比较开,而801bp和802bp就几乎贴在一起了,越到后面贴的越紧,最后就连成一片分不清谁是谁了.
具体从哪里到哪里可信要看测序结果的信号峰.强烈的单峰才是有效的.
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