最近做酶切连接，为防自连碱性磷酸酶将5‘端去磷酸化，可是T4连接酶怎么连接去磷酸化的5’端和3‘-OH端啊因为T4连接酶就是催化5’P和3‘-OH没有了5’-P它怎么发挥作用啊

Question

最近做酶切连接，为防自连碱性磷酸酶将5‘端去磷酸化，可是T4连接酶怎么连接去磷酸化的5’端和3‘-OH端啊
因为T4连接酶就是催化5’P和3‘-OH没有了5’-P它怎么发挥作用啊

Answer 1

据NEB M0202 T4 DNA 连接酶的产品说明：
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。
也就是说载体切口两端4条链在碱性磷酸酶作用下均变成了羟基，而未被处理的目的片段每端各有一个磷酸基团和羟基，这样连接的话两端会各有一个5‘羟基和3’羟基的缺口（nick），然后T4连接酶具有修复神力，于是就呵呵了。