回答下列有关酶与基因工程的问题．锌指核酸酶（ZFN）是由锌指蛋白（Zn）与核酸内切酶（FokI）组成的融合蛋白．每个FokI单体与3个锌指蛋白单元相连，构建一个ZFN．通过3个Zn的组合可构建

Question

回答下列有关酶与基因工程的问题．
锌指核酸酶（ZFN）是由锌指蛋白（Zn）与核酸内切酶（FokI）组成的融合蛋白．每个FokI单体与3个锌指蛋白单元相连，构建一个ZFN．通过3个Zn的组合可构建识别不同序列的ZFN．当2个ZFN的识别位点相距恰当的距离时，2个ZFN就形成二聚体产生酶切功能．图1表示锌指核酸酶的作用过程，其中虚线段之间为6个碱基对．

（1）据图1分析，在锌指核酸酶中，识别特定核酸位点的结构是___，切断相邻核苷酸之间化学键的结构是___．
（2）据图1分析，一个ZFN单体能识别___个碱基的特定序列，图1中的2个ZFN单体识别的碱基序列___（相同/不相同）．
双链DNA分子中常存在4-8对碱基序列，呈旋转对称回文结构．不同的回文结构能被不同的限制酶识别并切割，如下表所示．回文序列也可通过构建相应的锌指核酸酶进行切割．图2为一段已知的碱基序列．

表：识别的回文序列及切割位点

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别的回文序列及切割位点

（3）表中能够对图2序列进行切割的酶是___，并将该限制酶切割所产生的末端序列在下边方框中
补充完整．若要得到相同的末端，所构建的ZFN在①链上的识别序列是___（从左到右书写）．

（4）理论上，通过不同锌指蛋白单元的组合，ZFN可以酶切DNA片段上任意的部位．那么理论上一个锌指蛋白单元有___种，由其构成的ZFN有___种．

Answer 1

（1）由图1可知，在锌指核酸酶中，识别特定核酸位点的结构是锌指蛋白，切断相邻核苷酸之间磷酸二酯键的结构是核酸内切酶（FokI）．
（2）由图1可知，一个ZFN单体包括一个FokI单体与3个锌指蛋白，其中每个锌指蛋白能识别3个碱基，因此一个ZFN单体能识别9个碱基的特定序列；图1中的2个ZFN单体识别的碱基序列不相同（左侧ZFN单体识别的序列为GCG-GGT-GGG，而右侧ZFN单体识别的序列为GCG-GGT-GCG）．
（3）对照图2和表中四种限制酶的识别序列可知，表中能够对图2序列进行切割的酶只有EcoRI，由于EcoRI的识别序列为GAATTC∥CTTAAG，且切割位点在G和A之间，因此用该酶切割后产生的末端序列为．若要得到相同的末端，所构建的ZFN在①链上的识别序列是限制酶EcoRI的识别序列的后9个碱基序列，即ACG-TGC-CGA．
（4）一个锌指蛋白单元对应3个碱基，每个ZFN有3个锌指蛋白单元，因此理论上一个锌指蛋白单元有4×4×4=64种，由其构成的ZFN有64×64×64=64³种．
故答案为：
（1）锌指蛋白   FokI
（2）9   不相同
（3）EcoR I，ACG-TGC-CGA
（4）64，64³