已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题：（1）图1表示的是一个经过的作为载体的质

Question

已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题：

（1）图1表示的是一个经过___的作为载体的质粒，其化学本质是___．作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有___．
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是___．若将基因表达载体导人大肠杆菌，一般先用钙离子处理，使其成为___细胞，以利于吸收周围环境中的DNA分子；然后让基因表达载体在___中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．
（3）为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加___，培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物是图2中___．

Answer 1

（1）图1表示的是一个经过人工改造的作为载体的质粒，质粒的化学本质为小型环状DNA；基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等．
（2）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca²⁺处理，使其处于感受态，以利于吸收周围环境中的DNA分子；然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．
（3）了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
故答案为：
（1）人工改造      环状DNA分子    目的基因和终止子
（2）BclI和HindⅢ感受态    缓冲液
（3）四环素    引物甲和引物丙