我想请问你关于real-timePCR中溶解曲线的横轴和纵轴的意义?我做的两个样品里峰值在X的同样的位置,但一个样品的峰高,一个低.电泳出来的条带大小也不在一条线上.不知道是什么原因.

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我想请问你关于real-time PCR 中溶解曲线的横轴和纵轴的意义?
我做的两个样品里峰值在X的同样的位置,但一个样品的峰高,一个低.电泳出来的条带大小也不在一条线上.不知道是什么原因.

▼优质解答

答案和解析

横坐标是温度,每个温度点一个.一般从60到98度
纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）.一开始加热的时候,虽然荧光强度比较强,但是由于双链没有解离,所以荧光强度保持不变.当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,然后把2者的差值标在图上.Tm到达时,有一般双链解离,这时的荧光强度变化最大（峰值）.再加热,双链全部解离,所以荧光强度的变化又变小了.
你PCR产物大小不一,但是只要有相同或者相近的Tm,峰值就有可能在一个位置上.如果实际测得的峰值和理论计算的吻合,问题不大.如果有差别,说明有非特异性产物,建议不要再用SYBR GREEN方法.

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