如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了质粒和目的基因中相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：限制酶BamHⅠBclⅠSau3

Question

如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了质粒和目的基因中相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具有的基本条件有___（答出两点即可），而作为基因表达载体，除了满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子．
（2）根据表格分析，经BamHⅠ酶切后得到的DNA片段___（“可以”或“不可以”）与经HindⅢ酶切后的产物连接，理由是___．
（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用两种限制酶切割，即BelⅠ酶和___．酶切后的载体和目的基因片段，通过___酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于___态的大肠杆菌．
（4）转入了重组质粒的大肠杆菌可在添加了___的培养基表面长出菌落．若用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中___．

Answer 1

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有具有标记基因、具有一个或多个限制酶切点、能在受体细胞中复制并稳定保存．
（2）根据表格分析，经BamHⅠ酶切后得到的DNA片段不可以与经HindⅢ酶切后的产物连接，理由是产生的粘性末端不同．
（3）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BelI和HindⅢ两种限制酶切割．酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌．
（4）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
故答案为：
（1）具有标记基因、具有一个或多个限制酶切点、能在受体细胞中复制并稳定保存
（2）不可以  产生的粘性末端不同
（3）HindⅢDNA连接酶  感受
（4）四环素  引物甲和引物丙