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pcr扩增时如何计算各组分的体积（即各种物质根据反应总体积,如何确定其他物质的体积）
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pcr扩增时如何计算各组分的体积（即各种物质根据反应总体积,如何确定其他物质的体积）
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答案和解析
固定的反应试剂：比如buffer,dNTP,酶的用量一般都是固定的,按照protocol给出的要求加.
关键是模板和引物的量.模板不能加太多,一般是50ul体系10-100ng左右,体积根据你DNA模板的浓度确定,比如你的DNA浓度是100ng/ul,你加1微升就够了.如果浓度太高,适当稀释一下.
引物的浓度一般是终浓度0.2uM.把引物稀释成10uM的,加1微升到50ul体系里头.最后用水补齐到50ul.加的时候最好先加水,再加buffer,然后模板,引物,最后加酶.冰上操作.
关键是模板和引物的量.模板不能加太多,一般是50ul体系10-100ng左右,体积根据你DNA模板的浓度确定,比如你的DNA浓度是100ng/ul,你加1微升就够了.如果浓度太高,适当稀释一下.
引物的浓度一般是终浓度0.2uM.把引物稀释成10uM的,加1微升到50ul体系里头.最后用水补齐到50ul.加的时候最好先加水,再加buffer,然后模板,引物,最后加酶.冰上操作.
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