水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么不同?在DNA和RNA的提取上,水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么区别吗?

Question

水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么不同?
在DNA和RNA的提取上,水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么区别吗?

Answer 1

水饱和酚和Tris饱和酚（ Phenoi Water/Tris-phenol）的区别：
一、水饱和酚又叫水平衡酚.水饱和酚的PH小于7,一般是PH为5.0左右,通常与异硫氢酸胍一起使用,用于细胞RNA的提取,在酸性环境中,DNA在酚相,RNA在水相.两者就分开了.
二、Tris饱和酚一般PH大于7.8,用于DNA的提取.其中,酚是强的蛋白变性剂,可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出. 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化,若酚类氧化,则会形成醌（两个苯环）,醌含有强自由基,会破坏核酸结构. 同时,由于PH值大于7,在碱性环境中DNA处于水相,RNA处于有机相.从而分离上清,即可得到DNA.
Tris饱和酚的配置：
1、冰箱取出重蒸酚,室温放置－－－68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂
2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％,（原液14. 4MOL/ML）,混匀,溶液呈现黄色,倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）
3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后,静至分层；放出下层黄色酚液,弃上层
4、加固体Tris约1g/100ml酚,摇匀,去水相
5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次,至PH为8.0
6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存
7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化）,则不能使用