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基因工程中转化的方法有哪些?什么是载体转化法?
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基因工程中转化的方法有哪些?什么是载体转化法?
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答案和解析
通过转化将载体DNA导入受体菌继而得到含有目的DNA插入的转化菌株是构建DNA文库最为关键的一步.
化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物.
直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来.但这种方法工作量大,具有一定的盲目性.20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术（也叫PCR技术）,使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增.上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术.
化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物.
直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来.但这种方法工作量大,具有一定的盲目性.20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术（也叫PCR技术）,使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增.上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术.
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