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293T细胞是怎么包装病毒的我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的
题目详情
293T细胞是怎么包装病毒的
我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的
我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的
▼优质解答
答案和解析
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):
第一天:
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天:\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS(从此刻开始算时间).
第三天:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天:
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天:
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
说句实话我是复制过来的,希望可以帮你.
第一天:
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天:\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS(从此刻开始算时间).
第三天:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天:
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天:
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
说句实话我是复制过来的,希望可以帮你.
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