细胞培养的生长条件?1.营养需要包括基本营养物质和促生长因子2.细胞生存环境3.关于污染及无毒

Question

细胞培养的生长条件?
1.营养需要 包括基本营养物质和促生长因子
2.细胞生存环境
3.关于污染及无毒

Answer 1

一、细胞培养的条件和要求
1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染.
目前最可靠和最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌.
如：玻璃制品、布类、金属制品：6.8kg20min.
橡胶制品：3.4.5kg10min.
培养用液,如Hanks液,水解乳蛋白：3.4.5kg10min.
实验中染菌物品和动物尸体等：6.8 kg20min.
试管、吸管等,则可采用干热灭菌；
一切不适于加热灭菌的液体,如人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可采用过滤法除菌.
细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合
2.必须有足够的营养供应,而绝对不可有有害的物质,包括极微量的有害离子的掺入,为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量.
细胞培养中对水的质量要求很高（见水处理）.
3.保证有适量的氧气供应.
细胞代谢需要有空气,否则细胞死亡.在用培养瓶进行静止培养,或用转瓶进行旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30％,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气.当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5％CO2的空气,或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合,过量氧对细胞的生长也不利.
4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物.
细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,这些产物对细胞的生存有害,必须及时清除.在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示黄色,表示已有相当量乳酸产生,要及时更换新鲜的培养基.在大量培养时,则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量,并调节灌流速度,使代谢产物保持在无害水平下.
5.有良好的适于其生存的外界环境,包括温度、pH、渗透压和离子浓度等.
不同的细胞对pH的要求不同,一般来说适于细胞生长的pH在6.7.4,过高或过低均不利于细胞生长.如上所述,细胞在代谢过程中会产生大量乳酸,使培养的pH下降.为了保持培养液的pH,常在培养液内加入各种缓冲系统,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3（CO2）、Tricineglycine,以及加缓冲剂Hepes液（常用浓度为10～50mol/L）.
6.及时分种,保持合适的细胞密度（见细胞传代）
二、细胞分离
1.人白细胞的分离.
常用于IFN－α和γ的制备.
它主要来源于献血者的静脉血,也可来自手术时体外循环剩余血,分娩时脐带血,以及脾脏和扁桃体等组织.
2.人胚肌皮细胞的分离 .用于IFN-β的制备 .
三.体外培养细胞龄的计算
二倍体细胞龄以细胞群体倍增计算,以每个培养容器细胞群体细胞数为基础,每增加一倍作为一世代,即1瓶细胞传2瓶（1：2分种率）再长满瓶为一世代；1瓶传4瓶（1：4）为二世代；1瓶传8瓶（1：8）则为三世代.生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3内.
传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代,每传一次为一代.依据每个细胞系的实践经验数据,确保细胞质量及安全,确定生产使用细胞最后限制代次.
四.细胞鉴别试验
新建细胞系或株、细胞库和生产结束时的细胞应进行鉴别试验,以确认为本细胞.可采用遗传特征、DNA指纹图谱、染色体标记、免疫学、HLA和生化法（如同功酶）测定,任选其中一种方法.有简便而能鉴别的方法亦可采用,但需经国家药品检定机构认可.
人二倍细胞株来源于正常人胎肺或其他组织,主要用于培养病毒制备疫苗等.
1.细胞株的要求
人二倍体细胞株须按下列要求进行全面检定.
（1）建立细胞株必须具备下列资料
建立细胞株所用的胎儿的胎龄和性别,终止妊娠原因.
建立细胞株所用的胎儿父母的年龄、职业及健康状况（经医生出具证明）,胎儿父及母系三代应无明显遗传缺陷疾病历史.在取胎儿组织前,应做出详细调查.
原始组织种类,原始细胞培养的细胞数量与生长的状况.
细胞培养方法、历史、生长特征和寿命的世代数.
细胞生长液的成分.