为什么我用CTAB法提取的DNA会出现黄绿色?我在地里面取的小麦叶片,放在零下40°冰柜冷藏,开始的时候提的还干净,DNA用重蒸水溶解以后还是无色,但后来提的就开始变成黄绿色了?

Question

为什么我用CTAB法提取的DNA会出现黄绿色?
我在地里面取的小麦叶片,放在零下40°冰柜冷藏,开始的时候提的还干净,DNA用重蒸水溶解以后还是无色,但后来提的就开始变成黄绿色了?

Answer 1

要用冰冻材料提出高质量的基因组DNA,应确保以下几点：
1.确保采样后立即投入液氮中保存.
2.在磨样时一定要一直使材料处于低温状态.研磨前先将液氮倒入研钵,研钵彻底冷却后,再放入材料,研磨过程中,一定不要让液氮挥发净使材料回温!否则会DNA降解得很厉害.装管的时候,材料一定要有液氮的保护才行!否则研磨时的液氮保护DNA不都前功尽弃了?
可以这样做：将几个离心管放入一个容器,向容器中加液氮,将其冷冻一下,使之处于低温状态,将液氮还为挥发干净的材料放入管内,不要急着盖盖子,因为液氮不挥发干净就盖上会再次弹开.将离心管放入盛有液氮的容器,等管内的液氮挥发干净盖上盖子即可.
另外,如果是在离心管上编号,最好在冷冻前写好,否则离心管冷冻后材料会受影响不说,也很难写上.
提取DNA时加液氮的目的主要是防止DNA的降解,所以必须一直提醒自己,减少材料回温的机会,液氮保护必须自始至终.
3.在用CTAB法提取时,刚投入水浴时可以稍快速的晃动,之后的晃动一定要轻柔!
4.加酚/氯仿/异戊醇静置30min后,离心温度不可过低.尽量保持在15度以上.
5.将DNA加入异丙醇析出时用的枪头一定要剪过的.这点很重要.过尖的枪头会把DNA链弄断.
6.加入异丙醇后出现的DNA絮状物尽量要挑出,尽量不要离心,因为离心后虽然产量会增大,但是不完整的DNA也增多了.
另外,看楼主的电泳图条带比较弱,看来不只是降解,提取量也比较少.这里对于增加提取量想说明一点,在研磨样品时,研得细和研得很细,提出的DNA量可以相差几倍!所以,在液氮保护的很好的情况下多研磨几次,要比在后面的过程中离心以增加产量要划得来!
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