血红蛋白属于哪类蛋白质它的吸收光谱反映它的什么结构成分

Question

血红蛋白属于哪类蛋白质它的吸收光谱反映它的什么结构成分

Answer 1

实验二 血红蛋白 及其衍生物的吸收光谱测定 \x0c目的要求 掌握722型分光光度计的使用 型分光光度计的使用 掌握 了解血红蛋白及其衍生物的吸收光谱的测定 掌握血红蛋白标准曲线的绘制 \x0c实验原理 分光光度计的使用 溶液中的物质在光的照射激发下，产 溶液中的物质在光的照射激发下， 生了对光吸收的效应， 生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是 具有选择性的， 具有选择性的，各种不同的物质都具有其 各自的吸收光谱， 各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶 液时，其能量就会被吸收而减弱， 液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量 减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关 也即符合于比色原理---朗伯 朗伯-比耳定律 系，也即符合于比色原理 朗伯 比耳定律 \x0c朗伯比尔定律： 朗伯比尔定律： A=εlc A：物质的吸光度 ε：摩尔吸光系数 l：液层的厚度 c：溶液的浓度 \x0c比色皿的使用 ? 手持毛玻璃面，不可触碰光滑面 手持毛玻璃面， ? 使用前要再用少量（大约1-2ml）待测溶液 使用前要再用少量（大约 ） 润洗1次 润洗1次 ? 使用时比色皿光滑面对准光路 ? 使用后及时清洗（用海绵刷沾取肥皂液清 使用后及时清洗（ 洗比色皿，并用自来水冲洗干净， 洗比色皿，并用自来水冲洗干净，随后用 蒸馏水润洗1-2次 蒸馏水润洗 次） \x0c血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 血红蛋白(Hb)与O2结合生成氧合血红蛋白 与 结合生成氧合血红蛋白 血红蛋白 (HbO2)，与CO结合生成碳氧血红蛋白 结合生成碳氧血红蛋白 ， 结合生成碳氧血红蛋白(HbCO)。 。 因其血红蛋白分子结构不同，当光线分别透 因其血红蛋白分子结构不同， 过各种Hb溶液时，所吸收的光波也各异， 过各种 溶液时，所吸收的光波也各异，可显 溶液时 出特有的吸收光谱。 出特有的吸收光谱。这些吸收光谱可作为它们定 性和定量分析的基础。 性和定量分析的基础。 \x0c在可见光波长400~600nm范围 如HbO2在可见光波长 范围 内有3个特征的吸收峰，其峰值分别在 内有 个特征的吸收峰，其峰值分别在415、 个特征的吸收峰 、 541和576nm处，当氧合血红蛋白转为碳氧 和 处 血红蛋白（HbCO），此时光谱发生改变， ），此时光谱发生改变 血红蛋白（ ），此时光谱发生改变， 在波长419、540和569nm处出现三个特征 、 在波长 和 处出现三个特征 的吸收峰，其中在 范围内2个 的吸收峰，其中在500~600nm范围内 个 范围内 特征的吸收峰如下图。 特征的吸收峰如下图。 \x0c项目 HbO2 HbCO 吸收峰数 2 2 吸收光谱（ ） 吸收光谱（nm） 541 577 540 569 \x0c本实验先制备Hb及其衍生物， 本实验先制备 及其衍生物，然 及其衍生物 后在不同波长下测其光吸收度， 后在不同波长下测其光吸收度，以吸 光度（ ） 又称光密度）为纵坐标， 光度（A）（又称光密度）为纵坐标， 波长为横坐标绘制成吸收光谱曲线， 波长为横坐标绘制成吸收光谱曲线， 由此可以确定它们最大的吸收波长。 由此可以确定它们最大的吸收波长 \x0c仪器和试剂 1．仪器：试管；吸量管； 量筒；722型分 ．仪器：试管；吸量管； 量筒； 型分 光光度计； 发生器 发生器。 光光度计；CO发生器。 2．试剂： ．试剂： （1）浓H2SO4； ） （2）甲酸； ）甲酸； （3）蒸馏水； ）蒸馏水； （4）血红蛋白溶液。 ）血红蛋白溶液。 （5）NaOH； ） ； \x0c实验操作 预热仪器 选定波长 调节“ 点 调节“0”点 调节T=100％ 调节T=100％ T=100 测定 关机 分光光度计的使用 \x0c1．样品的制备： ．样品的制备： 用草酸钾抗凝，取静脉血，边取边轻轻摇动， 用草酸钾抗凝，取静脉血，边取边轻轻摇动， 即制得全血。 即制得全血。 （1）氧合血红蛋白（HbO2）液： ）氧合血红蛋白（ 加蒸馏水20ml， 取全血 ， 取全血0.1ml（3滴）盛于 加蒸馏水 （ 滴 小烧杯中，混匀，此即HbO2液，呈鲜红色。 呈鲜红色。 小烧杯中，混匀，此即 （2）碳氧血红蛋白（HbCO) 液： ）碳氧血红蛋白（ 取上述HbO2液约 液约5ml于试管中，通CO气体 于试管中， 取上述 于试管中 气体 浓硫酸与甲酸在CO发生器中反应发生）约10 发生器中反应发生） （浓硫酸与甲酸在 发生器中反应发生 即变成樱桃红色的 溶液。 秒钟，HbO2即变成樱桃红色的HbCO溶液。 秒钟， 溶液 \x0c2．吸光度测定： ．吸光度测定： （1）将如上制备的 种血红蛋白液分别 ）将如上制备的2种血红蛋白液分别 盛于比色杯内， 盛于比色杯内，在722型分光光度计上以蒸 型分光光度计上以蒸 馏水为空白调节吸光度零点和100%（每一 馏水为空白调节吸光度零点和 （ 次读数均应用空白管调节零点和100%）。 次读数均应用空白管调节零点和 ）。 （2） 先从波长 ） 先从波长500~600nm分别测定 分别测定 HbO2，碳氧血红蛋白的吸光度（在相应峰 碳氧血红蛋白的吸光度（ 值的10nm范围内每隔 值的 范围内每隔2nm记录一次吸光度 记录一次吸光度 范围内每隔 读数，其余均每隔10nm记录一次吸光度读 读数，其余均每隔 记录一次吸光度读 数）。 \x0c3.吸收光谱曲线的绘制 吸收光谱曲线的绘制 以吸光度为纵坐标， 以吸光度为纵坐标，波长为横坐标描 并将各点连接成曲线， 点，并将各点连接成曲线，即为血红蛋白 及其衍生物的吸收光谱，但由于使用仪器 及其衍生物的吸收光谱， 不同， 不同，绘制出的血红蛋白及其衍生物的吸 收光谱必有一些差异，对722型分光光度计 收光谱必有一些差异， 型分光光度计 来说，峰值误差在± 来说，峰值误差在±3nm~5nm波长内是允 波长内是允 许的。 许的。 \x0c注意事项 分光光度计应放在干燥处，使用温度为5 35℃ 35℃。 分光光度计应放在干燥处，使用温度为5~35℃。远 离强电场、 离强电场、磁场 为了防止光电管疲劳。 为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿 暗箱盖打开，使光路切断， 暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命 每次做完实验时， 每次做完实验时，应立即洗净比色皿 当仪器停止工作时，切断电源， 当仪器停止工作时，切断电源，电源开关同时 切断。并且用套子盖住仪器， 切断。并且用套子盖住仪器，做好使用登记 \x0c思考题 ? 1、什么叫吸收光谱？测定血红蛋白及其衍 、什么叫吸收光谱？ 生物的吸收光谱有何意义？ 生物的吸收光谱有何意义？ ? 2、Hb属于哪类蛋白质，它的吸收光谱的特 属于哪类蛋白质， 、 属于哪类蛋白质 征反映它的什么结构成分？ 征反映它的什么结构成分？ \x0c