为什么制作考马斯亮蓝蛋白质标准曲线时,蛋白质含量少的和含量多的吸光值接近,其他组吸光值差距不大?

Question

为什么制作考马斯亮蓝蛋白质标准曲线时,蛋白质含量少的和含量多的吸光值接近,其他组吸光值差距不大?

Answer 1

首先,查看一下你的比色皿是否是洁净的,标准曲线所用蛋白最好是BSA,且需要完全溶解（最好是稀释一下,如果你的目的蛋白估计超过这个范围,也稀释一下）；
其次,标准曲线的各个样品必须是由同一母液稀释得到的,例如你要100ng/ul-1000ng/ul,建议采用1000ng/ul的母液稀释,如果你分别配制,会增大偶然误差；
最后,所用溶剂最好是PBS,这样既能保证担保的溶解,有能保证背景一致,同时要用不含蛋白的PBS来校正,不然也会导致你的问题出现,例如PBS背景的吸光值为2.000,如果你蛋白的吸光值仅为0.001,这样也会导致吸光值差距不大,不过不校正的话也不太会影响数据处理.希望对你有用.