关于设计引物需要在引物中引入酶切位点,想用Xba1和Kpn1,想问下保护碱基怎么加?阅读框怎样能不改变,另外,还用考虑发卡结构什么的吗?请问除此之外,还有没有其他的方法可以更方便的方法引

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关于设计引物
需要在引物中引入酶切位点,想用Xba1和Kpn1,想问下保护碱基怎么加?阅读框怎样能不改变,另外,还用考虑发卡结构什么的吗?请问除此之外,还有没有其他的方法可以更方便的方法引入酶切位点?

▼优质解答

答案和解析

酶切位点的保护碱基基本是大家常用以及默认的.Kpn1为：GGGTACCC 、GGGGTACCCC、CGGGGTACCCCG 三个,长度你可以根据你的引物来选择.Xba1为：CTCTAGAG 、GCTCTAGAGC 、TGCTCTAGAGCA 、CTAGTCTAGACTAG.具体要你自己来选择哪一个.比如退火温度,GC比值等等.保护碱基资料上都有,常见的酶切位点都有保护碱基.设计引物你可以用primer5和Oligo6软件来设计,参数全部都能算出来,包括发夹结构.你也可以定点突变来引入你的酶切位点,但是也很麻烦.其他的方法还有甲基化筛选等等,我就不是很熟悉了.

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