R一7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列（3′-UTR）结合，进而影响基因的表达．为研究R一7是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将

Question

R一7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列（3′-UTR）结合，进而影响基因的表达．为研究R一7是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将基因B中对应3′一UTR的刀NA片段与荧光素酶基因（R一7不影响荧光素酶基因的表达）重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果．请回答：
（l）利用PCR技术扩增基因B对应3′一UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核甘酸序列合成___．
（2）利用___酶可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体（如图1）上的位点___，构建重组载体．
（3）将重组载体与R一7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将___、___分别导入两组家蚕胚胎细胞．
（4）科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取___，经处理检测后获得相对荧光值（在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光），其结果如图2．
（5）依据实验结果可推断，R一7影响基因B的表达，即通过遵循___原则，R一7与基因B所转录的mRNA的3’一uTR结合，进而___（填“促进”或“抑制”）基因B的表达．

Answer 1

（l）利用PCR技术扩增基因B对应3′一UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核甘酸序列合成引物．
（2）构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；目的基因插入的位置应该在启动子和终止子之间，且不能破坏荧光素基因，因此可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体上的位点2，构建重组载体．
（3）将重组载体与R一7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将荧光素酶基因表达载体、重组载体分别导入两组家蚕胚胎细胞．
（4）基因表达产物是蛋白质．
（5）基因表达是指基因控制蛋白质的合成，包括转录和翻译两个步骤．R一7影响基因B的表达，即通过遵循碱基互补配对原则，R一7与基因B所转录的mRNA的3’一uTR结合，使基因B表达的翻译过程失去模板，因此R一7抑制基因B的表达．
故答案为：
（1）引物
（2）限制酶（或限制性核酸内切酶）和DNA连接酶    2 
（3）荧光素酶基因表达载体   重组载体
（4）蛋白质 
（5）碱基互补配对   抑制