枯草杆菌怎样培养?

Question

枯草杆菌怎样培养?

Answer 1

①取受体菌接种于BY培养液中,37℃培养到对数生长早中期.此时OD620应在0.4左右,培养时间约为4～5小时.
②将培养后的菌液离心,弃去上清液,再用生长培养基（GM液）洗菌一次,然后将菌体细胞重新悬浮在与BY培养液等体积的GM液中.37℃继续振荡培养到对数生长后期.此时OD620应在0.0.9,培养时间约为3～5小时.
③以1:10的比例将GM液中培养的菌液稀释于转化培养基（TM液）中.即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中,在20×150mm的试管中,37℃振荡培养90分钟.
④加入供体质粒,至最终浓度1ug/ml,于20×150mm的试管中,37℃振荡培养30分钟.
⑤取200ul涂布抗性选择平板,37℃培养48小时.
【培养基配方】
A.        BY培养基：牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,葡萄糖5g,蒸馏水1000ml,pH7.5.
B.        1×最低盐溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4•3H2O 18.34g）,K2HPO4 6g,(NH4)2SO4 2g,柠檬酸钠（Na3C6H5O7•2H2O）1g,MgSO4•7H2O 0.2g,在蒸馏水中依次溶解,加水至1000ml.
C.        L- trp溶液,2mg/ml,贮于棕色瓶内,用黑纸包裹.（过滤灭菌）
D.        生长培养基：GM,使用时混合比例.1×最低盐溶液100ml,1M硫酸镁0.5ml,50%葡萄糖1ml,5%水解酪蛋白0.4ml,10%酵母汁1ml,L-trp 50ug/ml.
E.        转化培养基：TM,使用时混合比例.1×最低盐溶液100ml,1M硫酸镁0.5ml,50%葡萄糖1ml,5%水解酪蛋白0.2ml,L-trp 5ug/ml.
其中 50% 葡萄糖 过滤灭菌   5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高温灭菌
至于载体你可以试试 pAX01这是一个适用于芽孢杆菌属的过表达载体