绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白定位的理想标记．根据右面的图表回答下列问题：（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是T

Question

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白定位的理想标记．根据右面的图表回答下列问题：

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是T↓TCGA，N端伸出的核苷酸的碱基序列是C↑TGCA，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶______，再对______进行切割．
（2）若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据表中信息分析若采用BamHI 和PstI酶切，可得到______种DNA片段．
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察GFP的表达，图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是______ 也是标记基因．
（4）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到多项现代生物技术，图中⑤⑥⑦的过程属于______，而⑨过程属于______
（5）有人从未导入GFP基因的重组细胞发育成的早期胚胎中取得胚胎干细胞，并诱导分化为心脏并作为移植器官提供给人类，为避免免疫排斥反应，可以导入某种调节因子，以______的表达，此时该调节因子可被称作______基因．

Answer 1

（1）从图示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位点；N端伸出的核苷酸的碱基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位点；则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和Ti质粒，再用DNA连接酶把目的基因和运载体相连．
（2）PstI可将重组质粒的N端切开，而BamHⅠ能在重组质粒的黑色部分切开，这样就得到2种DNA．
（3）根据题意，将绿色荧光蛋白基因转移到猪体中，所以GFP是目的基因．
（4）由图可知，⑤⑥⑦过程为核移植过程，⑨过程将早期胚胎移入母猪体内，属于胚胎移植．
（5）根据题意，为避免免疫排斥反应，所以导入的调节因子能抑制抗原基因的表达，导入的调节因子属于目的基因．
故答案为：
（1）HindⅢ这PstⅠTi质粒
（2）2
（3）目的基因
（4）核移植   胚胎移植
（5）抑制抗原基因    目的