根据对样品的处理方式不同,聚丙酰烯胺凝胶电泳分为哪几类

Question

根据对样品的处理方式不同,聚丙酰烯胺凝胶电泳分为哪几类

Answer 1

根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理.
1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离.一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样.
2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象.100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺,并在室温保温30min.
3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1％SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为测定分子量来使用.