幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素，其不良预后是胃癌．据研究发现，目前我国有超过50%人感染了Hp病菌．Hp是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧

Question

幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素，其不良预后是胃癌．据研究发现，目前我国有超过50%人感染了Hp病菌．Hp是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧环境下均能生长，Hp的尿素酶极为丰富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保护细菌在高酸环境下生存．
在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养．实验基本步骤如下：
配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察．请回答：
（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有___，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现___色环带．
（2）步骤X的操作如图所示：

①微生物接种的方法很多，但都要注意___；图所示方法为___．
②图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是___．
③下列关于此实验的操作，正确的是___．
A．高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基灭菌后，冷却至室温倒平板
C．取10³、10⁴、10⁵倍的稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上
D．在皿盖上用记号笔做标记
（3）在培养时，需将培养皿___并放在恒温培养箱中，否则将可能导致___．
（4）临床上¹⁴C呼气试验检测是一种安全、准确的检测Hp的方法，其基本原理是当被检测者服用含有___的胶囊后，如患者的胃内存在Hp感染，则可将其分解为氨和¹⁴CO₂．

Answer 1

（1）由于尿素分解细菌能合成脲酶，脲酶能将尿素分解成氨，而氨会使培养基碱性增强，即pH升高，导致酚红指示剂变红．
（2）①微生物接种的方法很多，但都要注意防止杂菌的污染；接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，图示所示为稀释涂布平板法．
②图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是使微生物和无菌水混合均匀．
③A．高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；
B．含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基灭菌后，冷却至50℃左右倒平板，不需要冷却到室温，B错误；
C．取10³、10⁴、10⁵倍的稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上，C正确；
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D错误．
故选：C．
（3）培养时需将培养皿倒置并放在恒温箱中培养，倒置培养的目的也是为了获得单一菌落．
（4）如果人体感染了Hp，能将尿素分解为NH₃和CO₂，因而标记尿素中的C，可通过呼吸产物来判断是否感染Hp．
故答案为：
（1）尿素酶　  红
（2）①防止杂菌的污染    稀释涂布平板法           ②使微生物和无菌水混合均匀         ③C
（3）倒置　  无法形成单一菌落
（4）¹⁴C标记尿素