1975年英国科学家Milestein和Kohler开创了将产生抗体的单个细胞同瘤细胞融合的技术，解决了在体外培养并获得大量纯一的单克隆抗体的难题．如图一所示．阅读下列资料，并回答有关问题：资

Question

1975年英国科学家Milestein和Kohler开创了将产生抗体的单个细胞同瘤细胞融合的技术，解决了在体外培养并获得大量纯一的单克隆抗体的难题．如图一所示．阅读下列资料，并回答有关问题：
资料一：B淋巴细胞在体外培养条件下，不能无限大量增殖，故在培养条件下不能存活．瘤细胞在体外培养条件下可以无限传代，是“永生”的细胞．
资料二：细胞合成DNA有“主要合成途径”和“应急途径”（如图二所示）．当“主要合成途径”被阻断时，具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的细胞在主要合成途径被阻断时，可通过应急途径合成DNA，即细胞可利用次黄嘌呤合成嘌呤核苷酸，利用胸腺嘧啶核苷合成嘧啶核苷酸，从而继续合成DNA．骨髓瘤细胞具有正常型和具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷型（HGPRT-）和胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-），即该细胞不具有HGPRT和TK．
资料三：HAT培养基由次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷三种成分组成，简称HAT．氨基喋呤有阻断DNA主要合成途径的作用．

（1）获取小鼠脾细胞（B淋巴细胞）前，需向小鼠腹腔内注射___．旋转培养的小鼠骨髓瘤细胞选用___（正常型/缺陷型）．将脾细胞悬液与瘤细胞混合，离心去掉上清液．迅速向细胞沉淀物中加入___促融，静置1分钟，加稀释液终止其促融作用．
（2）①中加入___．其作用是___．其中，脾细胞不能存活，因为___；骨髓瘤细胞也不能存活，因为___；只有杂交瘤细胞能存活，因为___．
（3）过程②需检测___，筛选出X重复克隆．Y是___．
（4）杂交瘤细胞也可将T淋巴性的淋巴瘤或胸腺瘤同T淋巴细胞融合，产生T淋巴细胞杂交瘤，分泌均一的___．

Answer 1

（1）要制备单克隆抗体，正常小鼠免疫处理，需向小鼠腹腔内注射抗原，培养的小鼠骨髓瘤细胞选用缺陷型，将脾细胞悬液与瘤细胞混合，离心去掉上清液．迅速向细胞沉淀物中加入灭活的病毒促融，静置1分钟，加稀释液终止其促融作用．
（2）①培养基中加入次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷，其作用是阻断DNA主要合成途径，保留合成DNA的应急途径．其中，脾细胞不能存活，因为脾细胞在体外培养条件下，不能无限大量增殖，故在培养条件下不能存活，骨髓瘤细胞也不能存活，因为融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来．
（3）过程②需检测特异性抗体，筛选出X重复克隆．Y是单克隆抗体．
（4）杂交瘤细胞也可将T淋巴性的淋巴瘤或胸腺瘤同T淋巴细胞融合，产生T淋巴细胞杂交瘤，分泌均一的淋巴因子．
故答案为：
（1）抗原   缺陷型     灭活的病毒
（2）次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷    阻断DNA主要合成途径，保留合成DNA的应急途径
脾细胞在体外培养条件下，不能无限大量增殖，故在培养条件下不能存活
由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA．而只能利用糖与氨基酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡．
融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来．
（3）特异性抗体   单克隆抗体
（4）淋巴因子