华蟾素是我国经典抗肿瘤药物．研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验．请根据图中信息回答下列问题．Ⅰ．肝癌细胞的培养（1）培养肝癌细胞时，在培养

Question

华蟾素是我国经典抗肿瘤药物．研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验．请根据图中信息回答下列问题．
Ⅰ．肝癌细胞的培养
（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的___以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___．此外，每48h更换1次培养液，目的是___；同时还要提供适宜的温度、___、氧气和二氧化碳等环境条件．
Ⅱ．探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞．华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表．

华蟾素浓度（μg/ml）	0	0.105	0.21	0.42
TopoⅡ基因表达量	+++++	++++	++	+

①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加___．
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是___．

Answer 1

（1）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，补充合成培养基中缺乏的物质．为了防止动物细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素．定期更换培养液的目的是防止代谢物积累对细胞自身造成危害；同时还要提供适宜的温度、PH、氧气和二氧化碳等环境条件．
（2））①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应．其主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在逆转录酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增．PCR扩增过程需要添加引物、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和四种脱氧核苷酸．
②由图表可知，华蟾素浓度越高，TopoⅡ基因表达量越少．TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞．可推知华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是抑制TopoⅡ基因的转录/表达，最终导致TopoⅡ含量降低
故答案为：
（1）血清（血浆）      抗生素     防止代谢物积累对细胞自身造成危害     PH
（2）①逆转录     引物、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和四种脱氧核苷酸
②抑制TopoⅡ基因的转录，最终导致TopoⅡ含量降低