p53基因是人体内一种抑癌基因．该基因编码的p53蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复，使其恢复正常，或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡，阻止细胞癌变．“今又生”是我国首创的基因治疗药

Question

p53基因是人体内一种抑癌基因．该基因编码的p53蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复，使其恢复正常，或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡，阻止细胞癌变．“今又生”是我国首创的基因治疗药物之一，是世界首个获准上市的基因治疗药物，其核心成分是利用腺病毒和人p53基因拼装得到的重组病毒．“今又生”药物中的腺病毒经基因工程改造后，在宿主细胞内不能复制，不能整合到染色体上．请回答下列问题：

（1）将p53基因与腺病毒拼装成重组病毒，需要用到的工具酶有___．常用的基因工程载体除动植物病毒外，还有___．
（2）限制酶能将特定序列的核苷酸之间的___键切开，形成___末端．
（3）p53基因应插入载体的___之间，以便于基因的表达．
（4）p53基因的大量扩增可以采用PCR技术，该技术中需使用的一种特殊的酶是___．如图是需要扩增的p53基因在DNA中的位置示意图，扩增过程需要___种引物．经3次循环之后，只含目的基因的片段占所有扩增产物的比例为___．

Answer 1

（1）构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．基因工程常用的载体有：动植物病毒、质粒、λ噬菌体衍生物等．
（2）限制酶具有专一性，其能识别将特定核苷酸序列并将特定位点之间的磷酸二酯键切开，形成黏性末端或平末端．
（3）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．终止子也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．因此，p53基因应插入载体的启动子和终止子之间，以便于基因的表达．
（4）PCR技术需使用Taq酶，扩增过程需要2种引物．PCR技术的原理是DNA的复制，根据DNA半保留复制特点，经3次循环之后，只含目的基因的片段占所有扩增产物的比例为(2)/(23)=(1)/(4)．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶  质粒和λ噬菌体衍生物等
（2）磷酸二酯    黏性末端或平
（3）启动子和终止子                    
（4）Taq酶   2    (1)/(4)