[生物一现代生物科技专题]必答题肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑

Question

[生物一现代生物科技专题]必答题
肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图1．

请回答：
（1）进行过程①时，需用 ___ 酶切开载体以插入let-7基因．载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 ___ ．
（2）进行过程②时，需用 ___ 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养．
（3）研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞中提取．
___ 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 ___ （RASmRNA/RAS蛋白质）含最减少引起的．

Answer 1

（1）过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制性核酸内切酶（简称限制酶）对载体进行切割，以便于目的基因的插入；启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程．
（2）过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制现象后，可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，随后分装到新的培养瓶中进行传代培养．
（3）判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来检测，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交．根据题中信息“肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌”知，导入let-7基因后，肺癌细胞的增殖受到抑制；据图2可知，let-7基因影响RAS基因表达的机理是：let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（或限制）   启动子
（2）胰蛋白
（3）RNA   RAS蛋白