丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，是存在于人和禽畜肠道中的一种厌氧细菌，能抑制肠道中有害菌的生长并促进有益菌的生长，可用作禽畜饲料添加剂．某科研人员从断奶仔猪的盲肠内容物中分离

Question

丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，是存在于人和禽畜肠道中的一种厌氧细菌，能抑制肠道中有害菌的生长并促进有益菌的生长，可用作禽畜饲料添加剂．某科研人员从断奶仔猪的盲肠内容物中分离培养丁酸梭菌，进行了一系列相关实验．配制丁酸梭菌增殖培养基，培养基的成分如表中所示．

成分	酵母膏	牛肉膏	胰蛋白胨	葡萄糖	可溶性 淀粉	氯化钠	三水合 乙酸钠	半胱氨酸 盐酸盐	蒸馏水
含量	3g	10g	10g	5g	1g	5g	3g	0.15g	1000mL

（1）微生物生长繁殖所需的培养基中的主要物质有碳源、氮源、水和___．若要制备固体培养基，除上述成分外，还需加入的成分是___．为了保证无菌操作，调节pH后应对培养基进行处理，常采用的方法是___．
（2）除了保证无菌操作外，培养丁酸梭菌时还需要提供___环境，于37℃下培养36h左右．
（3）为统计丁酸梭菌的数目，将分离得到的一个丁酸梭菌菌落置于1L无菌水中，搅拌均匀后，取0.1mL上述液体用___法接种在一个培养皿上，重复操作，共制成三个带菌培养皿，继续培养一段时间后，统计三个培养皿中的菌落数分别是236、227、242，则该菌落中丁酸梭菌的数目大致为___个．
（4）用上述方法测得的丁酸梭菌的数量___（填“大于”、“等于”或“小于”）菌落中实际丁酸梭菌的数量，可能的原因是___．

Answer 1

（1）微生物生长繁殖所需的培养基中的主要物质有碳源、氮源、水和无机盐．若要制备固体培养基，还需加入琼脂作为凝固剂．为了保证无菌操作，调节pH后应对培养基进行高压蒸汽灭菌处理．
（2）根据题意可知，丁酸梭菌是一种厌氧细菌，因此除了保证无菌操作外，培养丁酸梭菌时还需要提供无氧环境，于37℃下培养36h左右．
（3）为统计丁酸梭菌的数目，需要采用稀释涂布平板法，即将分离得到的一个丁酸梭菌菌落置于1L无菌水中，搅拌均匀后，取0.1mL上述液体接种在一个培养皿上，重复操作，共制成三个带菌培养皿，继续培养一段时间后，统计三个培养皿中的菌落数分别是236、227、242，则该菌落中丁酸梭菌的数目大致=（236+227+242）÷3÷0.1×1000=2.35×l0⁶个．
（4）由于两个或多个丁酸梭菌连在一起时形成一个菌落，因此用上述方法测得的丁酸梭菌的数量小于菌落中实际丁酸梭菌的数量．
故答案为：
（1）无机盐     琼脂     高压蒸汽灭菌法
（2）无氧
（3）稀释涂布平板     2.35×l0⁶
（4）小于      两个或多个丁酸梭菌连在一起时形成一个菌落